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人β2-内啡肽(β2-EP)酶联免疫分析elisa试剂盒使用说明书

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资料简介

                         人β2-内啡肽(β2-EP)酶联免疫分析elisa试剂盒使用说明书
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elisa试剂盒使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中β2-内啡肽(β2-EP)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人β2-内啡肽(β2-EP)水平。用纯化的人β2-内啡肽(β2-EP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入β2-内啡肽(β2-EP),再与HRP标记的β2-内啡肽(β2-EP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β2-内啡肽(β2-EP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人β2-内啡肽(β2-EP)浓度。
elisa试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(4000ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2000 ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
1000 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
500 ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
250 ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
125 ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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